植物組織SOD活性測定
樣本提取：分別取0.4ｇ材料于預冷的研缽中，加入8 ml預冷的50 mmol-1磷酸緩沖液（pH 7.8）（先加2ml, 在冰浴下研磨成勻漿后，將勻漿轉入10ml離心管，再用6ml沖洗），10000 rpm離心15 min，取上清液定容至10ml后于4℃保存。上清液用于可溶性蛋白質含量、SOD活性及POD活性的測定。
SOD活性測定
1.顯色反應 取5mL指形管（要求透明度好）4支，2支為測定管，另2支為對照管，按表47–1加入各溶液。 混勻后，給1支對照管照上比試管稍長的雙層黑色硬紙套遮光，與其他各管同時置于4000lx日光燈下反應20-30 min(要求各管照光情況一致，反應溫度控制在25～35℃之間，使酶活性高低適當調整反應時間)。 當樣品數量較大時，可在臨用前根據用量將表47–1中各試劑(酶液和核黃素除外)按比例混合后一次加入2.65mL，然后依次加入核黃素和酶液，使終濃度不變。
表 47-1 各溶液顯色反應用量
3.SOD活性測定 至反應結束后，用黑布罩蓋上試管，終止反應。以遮光的對照管作為空白，分別在560nm下測定各管的OD值，計算SOD活性。 |
3.<結果計算>
已知SOD活性單位以抑制NBT光化還原的50%為一個酶活性單位表示，按下式計算SOD活性。 SOD總活性[u/g(FW)]= 式中：SOD總活性以酶單位每克鮮重表示。 比活力單位以酶單位每毫克蛋白表示。 ACK ——照光對照管的吸光度。 AE ——樣品管的吸光度。 VT ——樣品液總體積，mL。 V1 ——測定時樣品用量，mL。 W——樣品鮮重，g。 蛋白質含量單位為mg/g。 |
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