一氧化氮(NO)試劑盒說明書
硝酸還原酶法
一、實驗儀器:
試管、微量移液器、旋渦混勻器、離心機、37°C 恒溫水浴鍋,可見分光光度計(550nm) 二、適用范圍:
本試劑盒可測血清、血漿、培養細胞、培養液及動植物組織樣本中 NO 含量 三、測定意義:
一氧化氮( NO )是近年來生命科學研究領域中zui熱點課題之一,與心血管、神經、胃腸、泌尿、
免疫系統、腎病、肝病、糖尿病、腫瘤、創傷、感染、器管移植排斥反應和性功能調控等都有密切關 系。NO是一種新的免疫分子和炎癥介質、介導內毒素、TNF、IL-1β、IL-6 等細胞因子的病理作用。
- - - - - -
NO化學性質活潑,體內代謝轉化為亞硝酸鹽(NO2 )和硝酸鹽(NO3 ),血清NO2 與NO3 濃度之和 (NO2 + NO3 ),
- -
才能準確代表體內NO水平。血清 (NO2 +NO3 ) 含量測定,國內有的單位采用金屬鎘還原法,但該法操
- - -
作繁瑣 (血清需除蛋白),反應不易控制 (金屬鎘可將NO2 進一步還原),且不能完全將NO3 還原為NO2 ,
準確性差。 四、操作表:
| 空白管 | 標準管 | 測定管 |
雙 蒸 水 (ml) | 0.1 |
|
|
100μmol/L 標準應用液 (ml) |
| 0.1 |
|
樣本 (ml) |
|
| 0.1 |
試劑一 (ml) | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
試劑二 (ml) | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
混勻,37℃準確水浴 60 分鐘
試劑三 (ml) | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
試劑四 (ml) | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
充分旋渦混勻 30 秒,室溫靜置 10 分鐘,3500~4000 轉/分,離心 10 分鐘,取上清顯色。
上清(ml) | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
顯色劑 (ml) | 0.6 | 0.6 | 0.6 |
混勻,室溫靜置 10 分鐘,蒸餾水調零,550nm,0.5cm 光徑,測各管吸光度值。
五、計算公式:
1、血清(漿)中 NO 含量計算公式:
NO含量
測定OD值 − 空白OD值 標準品濃度 樣品測試前
= × ×
(μ mol / L)
標準OD值 − 空白OD值
(100μ mol / L)
稀釋倍數
2、組織樣本中 NO 含量計算公式
NO含量
測定OD值 − 空白OD值
= ×
標準品濃度
待測樣本蛋白濃度
÷
(μ mol / gprot*)
標準OD值 − 空白OD值
(20μ mol / L * *) ( gprot / L)