熒光定量PCR系列問題之無Ct值(信號)出現有以下幾種可能原因及解決方法解析:歡迎閱讀參考。
反應循環數不夠
一般都要在35個循環以上,可根據實驗情況增加循環(如至45循環), 但高于45個循環會增加過多的背景信號
檢測熒光信號的步驟有誤
一般SG法采用72℃延伸時采集,Taqman法則一般在退火結束時或延伸結束采集信號
引物或探針降解
可通過PAGE電泳檢測其完整性
模板量不足
對未知濃度的樣品應從系列稀釋樣本的zui高濃度做起
模板降解
避免樣品制備中雜質的引入及反復凍融的情況發生
目的基因在組織中不表達或者表達量低
嘗試其它組織
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