elisa實驗的使用目的概述
酶聯免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay 簡稱ELISA)是在免疫酶技術(immunoenzymatic techniques)的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術,ELISA過程包括抗原(抗體)吸附在固相載體上稱為包被,加待測抗體(抗原), 再加相應酶標記抗體(抗原),抗原(抗體)--待測抗體(抗原)--酶標記抗體的復合物,再與該酶的底物反應有色產物。借助分光光度計的光吸收計算抗體(抗原)的量。待測抗體(抗原)的定量與有色產正比。
根據勁馬多年的研究經驗指出ELISA可以用來檢測血清樣本,看有還是沒有某個抗原或抗體,也可以看該抗原或抗體是多還是少,可以比較不同血清樣本之間該抗原/抗體的含量高低。
如果該抗原是一個病原,或該抗體是一個對某病原具有特異性的抗體,則ELISA檢測該抗原或該抗體的結果,可以用來幫助判斷,提供血清的個體,是否感染或曾經感染過這個病原。
ELISA測定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法,其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時差所引起的平競爭等因素的影響,結果重復性較差,質量較難控制。
不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質量*一致,即使是通過批批檢的項目其檢測結果也存在差異,因此必須選擇和訂購長批號的試劑,并保證保存條件。嚴格執行這一標準可以避免因試劑批號改變而重新建立質控體系及重新評估試劑的復雜過程,并且能夠保證結果的穩定性;對于效期短、使用率低的試劑,應當小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,避免反復凍融造成試劑的失效。
標本干擾因素包括內源性干擾因素和外源性干擾因素,前者包括類風濕因子、補體、異嗜性抗體、自身抗體、等,后者包括標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存時間過長、標本凝固不全、冷凍標本的反復凍融等。