ELISA實驗所有方法的缺點很明顯：
1、重復性不好；
2、收自身抗體、嗜異性抗體等干擾，易出現假陽性；
3、不論儀器和手工操作，干擾因素較多。影響的是溫度和時間。
直接法（direct ELISA）
將抗原直接固定在固相載體上，參加酶符號的一級抗體，即可測定抗原總量，此一級抗體的特異性非常重要。
優勢：操作手續簡略，因無須運用二抗可防止交互反響。
缺陷：實驗中的一抗都得用酶符號，但不是每種抗體都適合做符號，費用相對進步。
間接法（indirect ELISA）
此測定辦法與直接法相似，不一樣在于一級抗體沒有酶符號，改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。
優勢：二抗能夠加強信號，并且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它最多的免疫反響性。
缺陷：交互反響發作的機率較高。
雙抗體夾心法（sandwich ELISA）
被檢測的抗原包被在兩個抗體之間，其間一個抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體，此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量；或不符號，再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當心選擇，才可防止交互反響或競爭一樣的抗原聯系部位。
優勢：高活絡、高專一性，抗原無須事前純化。
缺陷：抗原必定得具有兩個以上的抗體聯系部位。
競爭法（competitive ELISA）
樣本里的抗原（自在抗原）和純化并固定在固相載體上的抗原（固定抗原）一同競爭一樣的抗體，當樣品里的自在抗原越多，就能夠聯系越多的抗體，而固定抗原就只能聯系到較少的抗體，反之亦然。經清潔過程，洗去自在抗原和抗體的復合物，只留下固定抗原和抗體的復合物，拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬，依據呈色區別就可計算出樣品里的抗原含量。
優勢：可適用比擬不純的樣本，并且數據再現性很高。
缺陷：全體的敏感性和專一性都較差。
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