很多人覺得細(xì)胞凍存很簡(jiǎn)單，但是有些注意事項(xiàng)操作不好會(huì)影響或是損壞細(xì)胞的質(zhì)量哦，今天小編就來(lái)給大家總結(jié)下，凍存細(xì)胞的相關(guān)注意事項(xiàng)。
注意事項(xiàng):
1.欲冷凍保存之細(xì)胞應(yīng)在生長(zhǎng)良好(logphase)且存活率高之狀態(tài)，約為80~90%致密度。冷凍前檢則細(xì)胞是否仍保有其*性質(zhì)，例如hybridoma應(yīng)在冷凍保存前一至二日測(cè)試是否有抗體之產(chǎn)生。
2.細(xì)胞在液氮中可長(zhǎng)期凍存無(wú)*，而不會(huì)影響細(xì)胞活力;在-70度可保存數(shù)月。
3.注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DISO應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí)，無(wú)菌且無(wú)色以0. 22micron FGLP Telflon過(guò)濾或是直接購(gòu)買無(wú)菌產(chǎn)品，如Sigma D-2650)，以5~ 10mI小體積分裝，4C避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí)，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。
在開啟后一年內(nèi)使用，因長(zhǎng)期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液，可避免DMSO直接加入時(shí)釋放的熱里對(duì)細(xì)胞的損傷。緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液是使細(xì)胞逐步適應(yīng)高參，可降低細(xì)胞受損。DMSO可能引起部分白血病細(xì)胞株的分化，可換用10%甘油凍存。
4.冷凍保存Z細(xì)胞濃度:
①normal human fibroblast : 1~ 3x 10'ce1ls/ml
②hybridoma: 1~3x 10*cells/m1,細(xì)胞濃度不要太高，某些hybridoma會(huì)因冷凍濃度太高而在解凍24小時(shí)后DIE去。
③adherent tumor lines:5~ 7x10，依細(xì)胞種類而異。Adenocarcinoma解凍后須較高之濃度，而HeLa只需1~3x 10'cells/ml
④other suspensions:5~ 10X 10'cells/ml，human lymphocyte 須至少5X 10'cells/ml。
5.凍存可用10%~90%的血清，一般高濃度血清有助于維護(hù)細(xì)胞活力，此處介紹20%終濃度有利于細(xì)胞懸浮而少沉積(4 度時(shí))，復(fù)蘇存活率在80%~90%以上，對(duì)原代培養(yǎng)細(xì)胞，以90%血清凍存更為有效。
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