Western Blot，大名蛋白免疫印跡，小名“西方雜交”。作為定性定量兩把好手，毫不夸張地說，WB 可以說是實驗室人人必會的技能之一，但并非每人都能做出一張的曝光圖，宛若夜深的樓宇燈火闌珊。今天就教給新同學們新手WB避坑指南，避開那些容易出現的問題，讓你以后的WB曝光圖賞心悅目，小伙伴十人九慕，導師贊不絕口。
問題一：有些同學的WB圖，一大塊黑色，找條帶全靠猜。
這種情況原因有三：
1.封閉不充分
除了標記的抗體需要使用 0.5%-2% 的 BSA 封閉，建議大部分蛋白用 5% 脫脂奶粉在 4℃ 條件下過夜封閉。
2.洗膜不*
需用新配制 1xTBST 快速洗膜，每 5 分鐘更換新液，循環 3-4 次。
3.顯色液靈敏度過高
注意有些靈敏度過高的顯色液需要要稀釋后使用，否則會影響曝光。
問題二：白雪皚皚，同學們的心都涼透了，造成這種成像的原因是？
這種情況原因有三：
1.陽性對照必須加
定性實驗里，如果沒有出現你要的條帶，你需要一次陽性對照來證明，不是操作或者抗體有問題，是條帶真沒有。
2.抗體有無加錯
加抗體之前一定要確認種類，不然你用羊抗豬的抗體去雜鼠抗，當然會雜不出來。
3.抗體失效
有這個可能性但較小，*的方法就是使用那些被師兄師姐證明質量過硬的抗體啦。推薦使用使用*、高質量的抗體，記得關注售后服務哦。
問題三：有時候我們會發現所有的條帶都太淺，同預期相差甚遠，這種情況要怎么改善呢？
這種情況原因有二：
1.顯色液過少或者反應時間不足
顯色液的使用方法嚴格按照說明書要求。
2.抗體濃度
雖然抗體都有推薦使用濃度，有時也需要提高濃度才能使條帶清晰呈現。
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