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原代細(xì)胞如何培養(yǎng)

2025年06月10日 16:29:04      來源:上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司 >> 進(jìn)入該公司展臺      閱讀量:2

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    原代細(xì)胞培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng),是建立細(xì)胞系的步,其步驟包括取材→分離→培養(yǎng)和維持,今天小編給大家?guī)碓?xì)胞培養(yǎng)的一些技巧,希望大家能有所收獲!

    原代細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用
    1.為研究生物體細(xì)胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段;

    2.為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件;

    3.服務(wù)于臨床實(shí)踐,用于藥物篩選等。

    原代細(xì)胞培養(yǎng)之分離注意事項(xiàng)

    一、組織塊培養(yǎng)法

    1.組織塊接種后的前3天,在觀察和移動的過程中,注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動和振動,否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起。

    2.加入的培養(yǎng)液不宜過多,避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。

    3.當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞,它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細(xì)胞的生長。

    4.為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上,可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。

    二、貼壁型原代細(xì)胞

    1.原代培養(yǎng)的分離細(xì)胞在初次接觸體外環(huán)境時(shí),它們之間會互相影響,在這些細(xì)胞之間能產(chǎn)生一些促生長的活性物質(zhì),使細(xì)胞彼此互相促進(jìn)存活和生長。如果接種的細(xì)胞密度過低,細(xì)胞之間的促生長作用很小,也很難使細(xì)胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進(jìn)入獨(dú)立生存環(huán)境的變化過程。如果接種的細(xì)胞密度過大,會導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足,代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。

    2.適當(dāng)增大原代培養(yǎng)接種的細(xì)胞密度,給培養(yǎng)的細(xì)胞提供更多的類似于在體內(nèi)時(shí)細(xì)胞之間的相互作用,會極大提高原代培養(yǎng)的細(xì)胞在體外存活率。待細(xì)胞適應(yīng)體外環(huán)境后進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)再以較低的密度接種和培養(yǎng)。
    3.盡快使接種的細(xì)胞貼壁,是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵。可以在接種后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3h到5h,待細(xì)胞貼壁后,再補(bǔ)足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

    三、懸浮型原代細(xì)胞

    1.必須保持細(xì)胞的懸浮狀態(tài)。可以通過增加培養(yǎng)液的黏度來幫助細(xì)胞呈懸浮狀態(tài),如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液,以5ml為低限度,否則攪拌時(shí)會產(chǎn)生氣泡對細(xì)胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快,否則即可使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下,可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。給懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞換液時(shí)要注意不要吸出細(xì)胞。

    2.能夠進(jìn)行懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞,其生命力一般都比較旺盛,體外分裂增殖的速度較快,營養(yǎng)成分消耗大,換液時(shí)間隔一般較短。

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